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Les vecteurs génétiques

Ligases : Enzymes recollant les bouts collants. Insertion d’un fragment d’ADN d’un organisme dans un autre différent mais étape intermédiaire : Vecteur génétique (virus ou plasmides utilisés car pénétrant naturellement dans les bactéries).

Insertion : Ouverture avec enzyme de restriction, insérer ADN et stabiliser avec ligase.

Ensuite : Arroser bactéries avec ces virus/plasmides, qui pénétreront en elles : Bactéries transformées ou recombinées.

Autres méthodes d’insertion : Microinjection (prendre un bout d’ADN et l’introduire directement, peut abîmer la cellule et pas efficace à 100%), canon à particules (bombarder une culture avec les gènes à introduire, peut abîmer le gène et la culture).

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Les sondes génétiques

(très utilisé dans la cartographie du génome humain)

Principe d’action : Hybridation moléculaire.

Ce sont des molécules d’ADN ou ARN marquées par un isotope radioactif de fonction connue.

Ex : Je cherche le gène de l’insuline. Je prélève des cellules en produisant et en extrait un ARNm que je rends radioactif. J’injecte les sondes à l’endroit où je veux localiser le gène : Les ARNm étant complémentaires du gène recherché, ils iront le « pêcher » et je pourrais les identifier grâce à l’isotope.

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Les endonucléases de restriction (ciseaux moléculaires)

Enzymes de restriction bactériennes. Protègent les bactéries contre l’ADN étranger selon un mécanisme de restriction : Couper l’ADN de l’intrus en fragments.

Si l’envahisseur possède des sites de restriction correspondant à la cible de l’enzyme, son ADN sera détruit avant d’avoir pu infecter l’hôte. Sinon, il résistera.

Le site de restriction, propre à chaque enzyme, est presque toujours défini par une symétrie de nucléotides : Structure en palindrome. En résulte un ADN fragmenté présentant des « bouts collants », séparables par électrophorèse et permettant d’isoler un gène particulier.

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